表1各项检测阳性情况比较
检测项目样本数阳性数阳性率/%尿液HCMV-DNA502856.001)淋巴细胞HCMV-DNA501224.001,2)母乳HCMV-DNA501836.001,2)血清HCMV-IgM501734.001,2)联合检测503978.00
付 慧
(河南省儿童医院，河南 郑州 450003)
【摘要】目的：探究不同标本巨细胞病毒 DNA 检测在新生儿巨细胞感染中的应用价值。方法：选取新生儿巨细胞感染患者50例，分别采集其尿液、淋巴细胞、母乳中的相关标本，对不同的标本实施相应的巨细胞病毒DNA检测，并对检测结果进行分析。结果：尿液标本中HCMV-DNA检测阳性率显著性高于淋巴细胞、母乳细胞的HCMV-DNA以及血清HCMV-IgM的阳性率(P<0.05)。结论：联合淋巴细胞、尿液以及血清等样本的检测，可以有效对新生儿巨细胞感染进行诊断，若不可进行联合检测，则首选尿液样本进行检测。
【关键词】巨细胞病毒；DNA检测；新生儿巨细胞感染
巨细胞病毒(HCMV)是导致患者出现巨细胞病毒感染的主要原因，主要分为先天性感染和后天性感染。孕妇在妊娠期间出现巨细胞感染时，其临床体征及症状并不明显，为隐匿性感染，少数会出现死胎、早产、流产以及胎儿发育迟缓[1]。新生儿免疫机制并不成熟，在出现巨细胞感染后，会增加脑膜脑炎、肺炎、智力下降、肝炎以及先天性耳聋等的发生概率[2]。因此，加强新生儿巨细胞感染患者的早期诊断和治疗十分必要。本研究对不同标本巨细胞病毒DNA 检测在新生儿巨细胞感染中的应用价值作一分析，报告如下。
1.1 基本资料 选取新生儿巨细胞感染患者50例，时间为2016年7月20日至2017年5月30日，年龄0～28 d，采集其尿液、淋巴细胞、母乳中的相关标本进行巨细胞病毒DNA检测，同时对其血清标本进行巨细胞病毒的IgM检测。
1.2 方法
1.2.1 淋巴细胞HCMV-DNA检测 采用FQ-PCR法(荧光定量PCR法)进行检测，将EDTA抗凝全血 1 mL加于含有生理盐水1 mL的离心管中，之后轻摇混匀，将混合液沿试管壁加于含淋巴细胞分离液1 mL的试管中，不能混匀、震荡，以2000 r/min的速度离心20 min，之后取淋巴细胞层再次进行离心处理(12 000 r/min，时间为5 min)，取沉淀物，将DNA提取液50 μg加入沉淀物中，并打匀，离心数秒，100 ℃保温10 min，离心处理(12 000 r/min，时间为5 min)，取2 μL上清进行PCR扩增。
1.2.2 尿液HCMV-DNA检测 采用FQ-PCR法(荧光定量PCR法)进行检测，充分混匀尿液样本，将100 μL样本加于含DNA浓缩液100 μL离心管中，充分混匀，并进行离心处理(12 000 r/min，时间10 min)，将沉淀物加于DNA提取液20 μL中充分打匀，离心数秒，100 ℃保温10 min，离心处理(12 000 r/min，时间5 min)，取2 μL上清进行PCR扩增。
1.2.3 乳汁HCMV-DNA检测 采用FQ-PCR法(荧光定量PCR法)进行检测，将1 mL乳汁加于离心管中，进行离心处理(12 000 r/min，时间为5 min)，将沉淀物加于DNA提取液50 μL中充分打匀，离心数秒，100 ℃保温10 min，离心处理(12 000 r/min，时间为5 min)，取2 μL上清进行PCR扩增。
1.2.4 血清HCMV-IgM检测 采用化学免疫发光法进行检测，采集其静脉血，加于促凝管中，血液样本在凝固后进行离心处理，取上清液进行相应检测。
1.3 观察指标 对不同标本HCMV-DNA的检测结果以及血清的HCMV-IgM检测结果进行观察分析。其中HCMV-DNA的增长曲线为S型，且定量结果>500 copies/mL则为阳性，其余为阴性；HCMV-IgM≥18 U/mL为阳性，<18 U/mL为阴性。
1.4 数据处理 研究数据均录入SPSS 22.00软件进行统计学处理，不同标本HCMV-DNA以及血清的HCMV-IgM检测阳性情况等计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
联合检测的阳性率显著性高于尿液、淋巴细胞、母乳细胞的HCMV-DNA以及血清HCMV-IgM的阳性率，尿液标本中HCMV-DNA检测阳性率显著性高于淋巴细胞、母乳细胞的HCMV-DNA以及血清HCMV-IgM的阳性率(P<0.05)。详见表1。
表1各项检测阳性情况比较
注：1)与联合检测比较P<0.05；2)与尿液HCMV-DNA比较P<0.05
HCMV是常见的先天性感染病毒，人体在受到HCMV感染后的3～5 d后会出现IgM抗体，其抗体的阳性是对其感染进行早期诊断的主要指标，表明患者处于活动性的感染状态，但是IgM抗体释放量的多少会受到患者的免疫反应状态、HCMV感染量等多种因素的影响，使得临床以IgM抗体作为患者疾病诊断的指标存在一定的局限性[3]。
HCMV是DNA病毒(双链)的一种，属于疱疹病毒属，对组织培养细胞或宿主有着较为明显的特异性。HCMV可以在人体的平滑肌、上皮、内皮等多种细胞中存在，其主要的靶器官包括胰、肾、肺、肝等[4]。巨细胞感染患者的唯一传染源是CMV，病毒可以从患者的宫颈、尿液、乳汁、血液、精液、阴道分泌物等多个部位排出，传染性较高。
HCMV感染具有多部位、间歇性排毒的特点，不同患者的个体差异以及感染部位存在一定的差异性，且其不同标本对病毒的释放量也存在一定的差异，因此，临床为新生儿巨细胞感染患者实施检测时，应将尿液、淋巴细胞的HCMV-DNA与其血清HCMV-IgM进行联合检测，若受到相关条件的限制不能联合进行检测，则应首选尿液HCMV-DNA检测，以提高患者的疾病检出率，为临床治疗提供依据。
参考文献：
[1]张玲，王刚，赵晓科，等.宫内巨细胞病毒感染与小儿脑性瘫痪临床特征的关系[J].山东医药，2016，56(44)：51-52.
[2]边鹏，温凤，韩兆香，等.59例小儿巨细胞病毒感染IL-2检测分析[J].吉林医学，2014，35(24)：5341-5342.
[3]肖晗，向贇，孙红，等.尿巨细胞病毒DNA与血清巨细胞病毒抗体检测在小儿巨细胞病毒感染中的应用[J].中国妇幼保健，2016，31(3)：617-619.
[4]刘海峰，彭华保，邝晓敏，等.先天性症状性巨细胞病毒感染脑脊液病毒载量与听力损伤相关性[J].中国小儿急救医学，2015，22(1)：27-29.
【中图分类号】R722.13
【文献标识码】A
DOI:10.11851/j.issn.1673-1557.2018.04.021
优先数字出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20180723.1554.026.html
基金项目：郑州市儿童医院项目(编号 2011030022) E-mail：fuhuifh123@sina.com
(收稿日期：2017-06-23)