白细胞介素17A在慢性乙肝患者血清的表达

【摘要】目的：通过分析慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中白细胞介素17A(IL-17A)的表达，旨在探索IL-17A与肝脏损伤、乙肝病毒(HBV)复制之间的关系。方法(1)对101例CHB患者和33例健康者用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-17A水平；(2)所有研究对象HBV抗原抗体采用ELISA法检测；(3)所有研究对象肝功能采用全自动生化分析仪检测；(4)采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测CHB患者HBV-DNA。结果(1)对照组、CHB轻度组、CHB中度组及CHB重度组之间血清IL-17A水平比较均有显著性差异(P<0.05)，且对照组、轻度组、中度组、重度组依次逐渐升高；(2)HBeAg阳性组与HBeAg阴性组的血清IL-17A水平无显著性差异(P>0.05)；(3)IL-17A与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)均呈正相关，相关系数r分别为0.816、0.762、0.181、0.509、0.345、0.403，P均<0.05；IL-17A与白蛋白(A)呈负相关(r=-0.194，P<0.05)；(4)血清IL-17A水平与HBV-DNA水平正相关(r=0.204，P<0.05)。结论(1)CHB患者血清中IL-17A水平升高，且随炎症程度加重、合成功能下降呈上升趋势，推测IL-17A可能参与了CHB患者肝脏受损和疾病进展；(2)IL-17A不能使e抗原发生血清学转换；(3)血清IL-17A的表达与HBV复制相关；(4)联合检测IL-17A和肝功能对CHB患者的病情、预后判断有参考价值。

WHO报道中称，全世界大约有20亿人曾经被HBV感染，且12%进展为慢性HBV感染[1]，其中每年大约65万人因最终发展为肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌而死，目前抗HBV治疗只能抑制病毒而不能彻底清除。细胞因子的概念被学者提出后，人们对其在病毒性肝炎、酒精性肝病、肝硬化等慢性肝病中的作用进行了大量研究，发现在引起肝组织损伤的发生、发展过程中，细胞因子有很重要的作用。

IL-17是近年来发现的一种前炎性细胞因子，包括6个成员：IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F。通常IL-17即特指IL-17A，是HBV感染的主要致炎细胞亚群，与乙型肝炎慢性化及肝功能损伤有关。虽然IL-17A的作用至今仍未完全明确，但已发现其具有强大的招募中性粒细胞、诱导多种细胞分泌炎症细胞因子和趋化因子等多种生物学功能，IL-17A在感染、慢性炎症反应和自身免疫性疾病中发挥重要作用，如慢性HBV感染、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮及多发性硬化等[2]。本试验采用ELISA法检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中IL-17A的水平，并与健康对照组进行比较，探索IL-17A与肝脏炎症损伤及病毒复制的关系，深入了解IL-17A在CHB的发生、发展阶段中所起的作用，为CHB的病情评估及预后提供新思路。

1 资料与方法

1.1.1 病例组 101例CHB患者来自2015年10月至2016年9月我院门诊及住院患者，均为汉族人。其中：男72例，女29例；年龄20～75岁，平均41岁。轻度组38例，其中：男28例，女10例；平均年龄(38.71±10.37)岁；中度组32例，其中：男20例，女12例；平均年龄(44.59±0.64)岁；重度组31例，其中：男24例，女7例；平均年龄(41.42±10.90)岁。诊断依据2015年中华医学会肝病学分会和感染病学分会修订的《慢性乙型肝炎防治指南》[3]诊断标准：HBsAg(+)，HBV-DNA阳性，肝功能异常，病程超过6个月。轻中重度分型依据2000年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》[4]分型标准。所有入选对象均未行免疫调节及抗病毒治疗，6个月内未保肝治疗；排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染；排除其他肝炎：如酒精性肝炎、脂肪肝、自身免疫性肝炎等；排除肿瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病及其他感染性疾病等。

1.1.2 对照组对照组33例来自2015年10月至2016年9月我院门诊汉族健康体检人员。其中：男18例，女15例；年龄21～61岁，平均(37.76±12.09)岁。排除HBV感染、肝功能异常者，其余标准同病例组。

1.2.1 血清收集用EDTA管抽5 mL研究对象静脉血，离心分离出血清并编号，存于-72 ℃低温冰箱；同时检测HBV血清标识物、肝功能、HBV-DNA等。

1.2.2 IL-17A的检测采用武汉伊莱瑞特生物科技有限公司生产的试剂盒。以ELISA法检测血清中IL-17A的水平。具体步骤依试剂盒使用说明进行。

1.3 统计学处理应用SPSS17.0软件，计量资料的多组间样本均数比较采用方差分析，进一步的组间比较采用基于方差不齐的Dunnett T3进行分析；采用Spearman相关分析分析ALT、AST、ALP、γ-GT、TBA、TBiL、A、HBV-DNA与IL-17A之间的相关性。

2 结果

表1各组临床指标测定比较

注：1)与对照组比较P<0.05；2)与CHB轻度组比较P<0.05；3)与CHB中度组比较P<0.05

CHB组血清ALT、AST水平均显著性高于对照组 (P<0.05)，CHB组随轻度、中度、重度逐渐升高 (P<0.05)；对照组及轻度组血清ALP水平显著性低于重度组 (P<0.05)，对照组与轻度组、中度组比较及轻度组与中度组之间比较均无显著性差异(P>0.05)；CHB组血清γ-GT水平明显高于对照组，CHB组随轻度、中度、重度逐渐升高，但无显著性差异(P>0.05)；CHB组血清TBA、TBiL水平显著性高于对照组 (P<0.05)，重度组与轻度组、中度组比较有显著性差异(P<0.05)，但轻度组与中度组比较无显著性差异(P>0.05)；CHB组血清A水平显著性低于对照组 (P<0.05)，重度组与轻度组、中度组比较有显著性差异(P<0.05)，轻度组与中度组比较无显著性差异(P>0.05)；CHB组间HBV-DNA水平均无显著性差异(P>0.05)。

2.2 CHB组与对照组血清IL-17A的表达对照组、CHB轻度组、CHB中度组、CHB重度组的血清IL-17A检测结果分别为(180±42)pg/mL、(300±102)pg/mL、(373±111)pg/mL、(578±379)pg/mL，各CHB组与对照组均有显著性差异(P<0.05)，CHB中度组与CHB轻度组比较和CHB重度组与CHB中度组比较亦有显著性差异(P<0.05)，CHB组随轻度、中度、重度逐渐升高。

表2 HBeAg阳性与HBeAg阴性的血清IL-17A检测比较

HBeAg阳性组与HBeAg阴性组血清IL-17A、HBV-DNA水平无显著性差异(P>0.05)。

2.4 血清IL-17A与ALT、AST、ALP、γ-GT、TBA、TBiL、A及HBV-DNA的相关性分析结果显示IL-17A与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)均呈正相关(r分别为0.816、0.762、0.181、0.509、0.345、0.403，P均<0.05)；IL-17A与白蛋白(A)呈负相关(r=-0.194，P<0.05)；血清IL-17A水平与HBV-DNA水平正相关(r=0.204，P<0.05)。

3 讨论

目前多认为宿主免疫功能在HBV感染的发病机理中起重要作用，而免疫应答调节的关键是细胞因子，HBV感染可使机体免疫系统活化，产生并释放各种细胞因子。HBV感染炎性损伤主要是宿主免疫功能紊乱，而乙型肝炎免疫异常就与细胞因子有关，其中IL-17A作为机体免疫调节网络中的关键因子，可能参与了乙型肝炎的免疫损害。本试验结果显示，CHB轻度组、中度组、重度组与对照组血清IL-17A水平均有显著性差异；CHB各病例组间进一步的比较，均有显著性差异，且随CHB轻度、中度、重度逐渐升高，与国内学者结果类似[5]。说明血清IL-17A水平的变化在一定程度上反映了肝脏受损的严重程度，与肝炎病情轻重密切相关，提示IL-17A参与了CHB的发病过程。

HBeAg阴性CHB较阳性者病程长、年龄大，常有持续或间歇性病毒复制，肝组织炎症坏死和肝纤维化明显，更易发展为肝硬化和肝细胞癌。本试验结果表明HBeAg阳性与HBeAg阴性CHB患者血清中IL-17A含量无显著差异，这种结果可能因为IL-17A只是反映肝脏炎症细胞因子中的一种，很难代表肝脏炎症的全部水平，再者所选对象年龄可能偏小，HBeAg阴性CHB在病程较短时其炎症、纤维化水平并不一定比HBeAg阳性CHB患者高。

本研究中，CHB组血清ALT、AST、ALP、γ-GT、TBA、TBiL均高于健康组，CHB组随分度的增加而增加；CHB组血清A均低于健康组，CHB组随分度的增加而降低；CHB组血清IL-17A与ALT、AST、ALP、γ-GT、TBA、TBiL均呈正相关，而与A呈负相关，说明随着肝功能损害程度加重，机体内的细胞因子变化程度显著，细胞免疫明显增强。HBV-DNA载量是HBV具有活动性及传染性的依据，本研究表明IL-17A与HBV-DNA呈正相关，提示HBV复制与IL-17A表达相关，表明肝脏损伤的严重程度与HBV持续存在和复制水平有关。

综上所述，CHB是一个复杂的免疫炎症过程，由多种免疫细胞和细胞因子参与，且各种免疫细胞和细胞因子之间相互影响、调节和制约。本研究通过检测CHB患者血清中IL-17A的表达情况，表明在CHB的发生和发展过程中IL-17A可能起重要作用，常规检测肝功能、HBV-DNA时联合检测细胞因子IL-17A对CHB病情严重程度及预后的判断有重要作用。

[1]OTT J J， STEVENS G A， GROEGER J， et al. Global epidemiology of hepatitis B virus infection： new estimates of age-specific HBsAg seroprevalence and endemicity[J]. Vaccine， 2012， 30(12)： 2212-2219.

[2]张祥明.慢性乙型肝炎病毒感染者疾病进展中Th17细胞的变化及意义[J].临床血液学杂志，2015，28(4)：294-297.

[3]中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].中国肝脏病杂志：电子版，2015，9(3)：1-18.

[4]中华医学会传染病与寄生虫分会与肝病分会学术会议.病毒性肝炎防治方案[J].肝脏，2000，15(4)：145-150.

[5]王凌旭.T细胞17与IL-17在慢性乙肝患者血清中的表达意义[J].医药论坛杂志，2016，37(9)：83-84.

Expressionofinterleukin-17AinserumofpatientswithchronichepatitisBanditsclinicalsignificance

(Department of Infection，Affiliated Hospital of Medical College of Shihezi University， Shihezi， Xinjiang 832002， China)

【Abstract】Objective: To explore the relationships between IL-17A and liver damage， hepatitis B virus(HBV) replication by analyzing the expression of IL-17A in serum of patients with chronic hepatitis B (CHB).Methods(1)The serum level of IL-17A was detected by ELISA in 101 CHB patients and 33 healthy controls； (2)HBV antigen-antibody was detected by ELISA in all research objects； (3)Hepatic function was detected by automatic biochemistry analysator in all research objects；(4)Real-time fluorescent quantitative PCR was used to measure HBV- DNA in CHB patients.Results(1)There were significant differences in the serum level of IL-17A between the control group， mild CHB group， moderate CHB group and severe CHB group (P<0.05)，and it gradually increased in the control group， mild， moderate， and severe groups；(2)There was no significant difference in the serum level of IL-17A between HBeAg positive group and HBeAg negative group(P>0.05)； (3)IL-17A was positively correlated with ALT， AST， ALP， γ-GT， TBA and TBIL； the correlation coefficient(r) was 0.816，0.762，0.181，0.509，0.345 and 0.403， respectively (allP<0.05)；IL-17A was negatively correlated with albumin(r=-0.194，P<0.05)；(4)A significantly positive correlation was found between the serum level of IL-17A and the level of HBV-DNA(r=0.204，P<0.05).Conclusion(1)The serum level of IL-17A increases in CHB patients， and it shows an upward trend with the aggravation of inflammation and the declined synthesis function， which suggests that IL-17A might be involved in liver damage and disease progression in CHB patients；(2)IL-17A can not contribute to the CHB patients with HBeAg serological conversion；(3)The expression of serum IL-17A is correlated with HBV replication；(4)The combined detection of IL-17A and hepatic function has a reference value for the judgment of pathogenetic condition and prognosis in CHB patients.

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白细胞介素17A在慢性乙肝患者血清的表达

1 资料与方法

2 结 果

3 讨 论

2 结果

3 讨论